GPComplex甘草多糖抗非小細(xì)胞肺癌藥效學(xué)研究
2023-04-10
GPComplex 甘草多糖抗非小細(xì)胞肺癌藥效學(xué)研究總結(jié)報(bào)告
一、試驗(yàn)目的
觀察灌胃給予GPComplex甘草多糖對(duì)人源肺癌H460細(xì)胞小鼠體內(nèi)移植模型的作用,對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的調(diào)節(jié)作用,從抑制腫瘤生長(zhǎng)、提高免疫方面初步評(píng)價(jià)GPComplex甘草多糖的抗腫瘤作用,探索劑量反應(yīng)關(guān)系、程度等,并大致判斷其是否具有毒性、程度及劑量反應(yīng)關(guān)系,為甘草多糖后續(xù)開發(fā)提供藥效學(xué)依據(jù)。
二、腫瘤細(xì)胞株
人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞H460,購自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
三、劑量設(shè)置、組別設(shè)置、給藥途徑及選擇依據(jù)
甘草多糖:根據(jù)合同規(guī)定,甘草多糖的小鼠給藥劑量設(shè)置低、中、高三個(gè)劑量,分別為0.25 g·kg-1、0.5 g·kg-1、1 g·kg-1。
紫龍金:臨床日用量為0.65 g/片×4片/次×3次/天=7.8 g,人按60 kg計(jì),小鼠按20 g計(jì),按體表面積換算小鼠的臨床等效劑量為1.5 g·kg-1。將紫龍金劑量設(shè)置為3 g·kg-1,為臨床等效劑量的兩倍。
索拉菲尼:臨床日用量為0.2 g/片×2片/次×2次/天=0.8 g,人按60 kg計(jì),小鼠按20 g計(jì),按體表面積換算小鼠的臨床等效劑量為0.15 g·kg-1。并根據(jù)前期該藥的試驗(yàn)結(jié)果,將索拉菲尼劑量設(shè)置為50 mg·kg-1,為臨床等效劑量的三分之一。
抗腫瘤試驗(yàn):共設(shè)計(jì)6組,分別為對(duì)照組、紫龍金組、索拉菲尼組、甘草多糖低、中、高劑量組,每組7只。
調(diào)節(jié)免疫功能試驗(yàn):共設(shè)計(jì)6組為,分別對(duì)照組、模型組、紫龍金組、甘草多糖低、中、高劑量組,每組10只。
甘草多糖擬臨床用藥途徑為口服給藥,因此選擇灌胃給藥;紫龍金及索拉菲尼均采用相似于臨床用藥途徑的灌胃給藥方式。
四、試驗(yàn)方法
- 采用人肺癌H460細(xì)胞小鼠皮下移植模型,觀察GPComplex甘草多糖對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。選用Balb/c-nu雌性小鼠,接種H460腫瘤組織塊,待小鼠體內(nèi)接種的腫瘤生長(zhǎng)至100mm3左右時(shí),依腫瘤體積分為對(duì)照組、甘草多糖高劑量(1 g·kg-1)組、中劑量(0.5 g·kg-1)組、低劑量(0.25 g·kg-1)組、紫龍金(3 g·kg-1)組、索拉菲尼(50mg·kg-1)組,每組7只。分組后隨即每天灌胃給藥1次,對(duì)照組給予去離子水,共持續(xù)32天,于末次給藥后次日取血后脫頸處死取腫瘤稱重。試驗(yàn)期內(nèi)每周2次測(cè)量腫瘤體積及動(dòng)物體重。
- 選用ICR雄性小鼠,隨機(jī)分為對(duì)照組,模型組,紫龍金(3 g·kg-1)組、甘草多糖高劑量(1 g·kg-1)組、中劑量(0.5 g·kg-1)組、低劑量(0.25 g·kg-1)組,每組10只。分組后即開始每天灌胃給藥1次,對(duì)照及模型組給予去離子水,共給藥14天。給藥第6、7天時(shí),除對(duì)照組外,其余各組小鼠均腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg·kg-1,第15天眼眶靜脈叢取血,EDTA抗凝,用于淋巴細(xì)胞亞群分析:CD3+(T細(xì)胞)、CD3+CD4+(輔助性T細(xì)胞和遲發(fā)超敏性T細(xì)胞)、CD3+CD8+(抑制性T細(xì)胞和殺傷性T細(xì)胞)、CD3-CD19+(B細(xì)胞)、CD3-CD335+(NK細(xì)胞),統(tǒng)計(jì)各陽性細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分比,并計(jì)算CD4/CD8的比值。
五、試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論
1. 人肺癌H460細(xì)胞小鼠皮下移植模型試驗(yàn)結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,GPComplex甘草多糖1 g·kg-1給藥32天可使抑瘤率超過30%,達(dá)30.5%,且對(duì)小鼠體重?zé)o明顯影響,提示GPComplex甘草多糖具有抑制人源肺癌H460小鼠體內(nèi)生長(zhǎng)的趨勢(shì),且無明顯毒副作用。
圖1甘草多糖對(duì)腫瘤H460體內(nèi)增殖模型的影響
2. 環(huán)磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型試驗(yàn)結(jié)果顯示,與正常小鼠比較,模型組小鼠給予環(huán)磷酰胺后,CD3、CD4、CD8、CD19陽性細(xì)胞比例明顯下降,CD335陽性細(xì)胞比例明顯升高。與模型組比較,甘草多糖1 g·kg-1給藥14天明顯升高CD3、CD4陽性細(xì)胞比例,降低CD335陽性細(xì)胞比例,逆轉(zhuǎn)環(huán)磷酰胺的不利影響。提示GPComplex甘草多糖1 g·kg-1灌胃給藥14天,具有明顯促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖,提高機(jī)體免疫功能的作用。
六、參考的規(guī)范和指導(dǎo)性文件
本研究參考CFDA(現(xiàn)NMPA)頒布的《細(xì)胞毒類抗腫瘤藥物非臨床評(píng)價(jià)的技術(shù)指導(dǎo)原則》(20080820頒布),同時(shí)遵循試驗(yàn)方案,并參考本公司制訂的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOPs)。
《新華每日電訊》報(bào)道我國(guó)成功提取高純度活性多糖
2024-08-22